ウマ娘のキャラクターデザインにおいて、最も基本的でありながらファンの間で広く知られているのが耳飾りの左右の位置による性別の見分け方です。すべてのウマ娘は少女の姿をしていますが、モチーフとなった競走馬の性別（牡馬・牝馬・セン馬）が頭部のアクセサリー配置によって厳格に区別されています。
公式設定およびキャラクターデザインの法則によると、以下のルールが一貫して適用されています。
- 右耳に飾り（リボン、ピアス、シュシュ等）：モチーフとなった実馬が「牡馬（ぼば＝オス）」であることを示す（例：トウカイテイオー、スペシャルウィーク、オグリキャップ、ゴールドシップなど）。
- 左耳に飾り：モチーフとなった実馬が「牝馬（ひんば＝メス）」であることを示す（例：ダイワスカーレット、ウオッカ、エアグルーヴ、メジロドーベルなど）。
- 両耳・無装飾などの特殊例：去勢された「セン馬」や、特定のモチーフ馬具（メンコなど）を両耳に装着しているキャラクター（例：サクラバクシンオーの勝負服での変化など）にも個別の文脈が存在する。
この「右＝牡馬」「左＝牝馬」というルールは、競馬界の伝統的な慣習や、人間のフォーマルファッションにおける男女のボタン掛け・アクセサリーの左右配置（男性が右、女性が左）をベースに構築されたものと考えられています。ファンの間では「ウマ娘の耳飾りを見るだけで初見のキャラの実馬性別が一瞬でわかる」と、極めて優れた記号論的デザインとして高く評価されています。
