3年E組を導いた教師陣と、物語の根底を支える大人たちも本作に欠かせない強烈な存在感を放っています。
殺せんせー（CV: 福山潤）の正体とE組担任になった理由
最高時速マッハ20で飛行し、無類の教育熱心さを見せる謎の黄色いタコ型生物。その正体は、かつて裏社会で「死神」と恐れられた伝説の初代暗殺者（人間の男性）でした。弟子（二代目死神）の裏切りによって捕らえられ、反物質人体の研究施設で実験台にされていた過去を持ちます。
そこで出会ったのが、監視役兼実験協力者であり、当時の3年E組担任だった雪村あぐりでした。彼女の無垢な優しさに触れて人間性を取り戻したものの、実験施設の暴走事故であぐりは致命傷を負ってしまいます。彼女の遺言である「あの子たちを教えてあげて」という最期の願いを果たすため、自ら触手の力を解放して脱走し、3年E組の担任として赴任しました。
烏間惟臣（CV: 杉田智和）とイリーナ・イェラビッチ（CV: 伊藤静）の結婚の経緯
防衛省臨時特務部から派遣された凄腕教官・烏間惟臣と、ハニートラップを得意とする凄腕暗殺者・イリーナ・イェラビッチ（ビッチ先生）。当初は仕事上のビジネスライクな関係だったものの、生徒たちの後押しや数々の死線を共にする中で、イリーナの不器用かつ一途なアプローチが堅物の烏間の心を動かしました。
物語終盤、殺せんせー暗殺計画の最終局面を経て正式に結ばれ、最終回後の未来では結婚して夫婦となっています。イリーナは烏間と同じく防衛省直属の諜報員として籍を置き、夫婦で国家機密任務に従事するという、ファン垂涎の結末を迎えました。
