来場者の大半を運ぶメインストリートが、大阪メトロ中央線です。終点のコスモスクエア駅から延伸された夢洲駅が会場の東ゲートに直結しており、改札を出れば目の前に万博のメインエントランスが広がります。
Osaka Metro各線やJR環状線（弁天町駅乗り換え）、阪神なんば線（九条駅乗り換え）など、関西圏の主要路線からの接続も抜群です。ピーク時間帯には最短2分半間隔で高頻度運転が行われており、圧倒的な輸送力を誇ります。
ただし、利便性が高い反面、朝の開場直前（午前8時30分〜10時頃）や、夜のパビリオン消灯・ドローンショー終了後の退場ラッシュ時には駅ホームおよび改札口周辺に入場規制がかかるケースがあります。帰りの切符購入で行列に並ぶ事態を避けるためにも、交通系ICカードへの十分な事前チャージ、またはQRコード対応乗車券の事前確保を強く推奨します。
